目的 人Ⅰ型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）對體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞有抑制膠原合成作用，擬進(jìn)一步探討Col Ⅰ A1 ASODN 對裸鼠移植模型體內(nèi)的人增生性瘢痕的膠原合成作用。 方法 SPF 級BALB/c-nunu 品系6 ～ 8 周齡雌性裸鼠60 只，體重約20 g；取行瘢痕切除手術(shù)患者自愿捐贈的瘢痕組織塊去表皮后，移植至裸鼠背部肩胛內(nèi)側(cè)皮下，每只裸鼠移植1 塊，制備人增生性瘢痕裸鼠移植模型。將58 只成功制備模型的裸鼠根據(jù)處理方法不同，隨機(jī)分成3 組，于瘢痕移植2 周根據(jù)分組行經(jīng)皮穿刺瘢痕內(nèi)注射。A 組（n=20）：5 μL 濃度為3 mmol/L Col Ⅰ A1 ASODN、3 μL 脂質(zhì)體、92 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；B 組（n=20）： 3 μL 脂 質(zhì)體、97 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；C 組（n=18）：100 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基。實驗最初2 周每天注射1 次，之后隔天1 次，至實驗取材。注射后2、4、6 周，對存活裸鼠進(jìn)行瘢痕硬度測量后，處死裸鼠取瘢痕組織行膠原染色組織學(xué)觀察以及透射電鏡觀察；提取細(xì)胞總RNA 后行RT-PCR 測定Col Ⅰ A1 mRNA 相對含量；ELISA 法行Col Ⅰ A1 蛋白定量分析。 結(jié)果 注射后6 周內(nèi)17 只裸鼠死亡；共41 只裸鼠40 塊瘢痕組織符合實驗標(biāo)準(zhǔn)，納入實驗；A、B、C 組各14、13、14 只。注射后2 周，3 組間瘢痕硬度比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；4、6 周時A 組與B、C 組比較， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。隨時間延長，組織學(xué)觀察示3 組Ⅲ型膠原表達(dá)上升，A 組最明顯，Ⅰ型膠原排列規(guī)則。透射電鏡觀察示A 組成纖維細(xì)胞退化，膠原纖維排列更趨于一致；B、C 組膠原纖維排列也逐漸規(guī)則。注射后2、4 周3 組間Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；6 周時A 組與B、C 組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕內(nèi)注射Col Ⅰ A1 ASODN 可抑制Col Ⅰ A1 mRNA 及Ⅰ型膠原表達(dá)，促進(jìn)瘢痕組織成熟、軟化，脂質(zhì)體可促進(jìn)該抑制效果。
探討陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)Ⅰ 型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）轉(zhuǎn)染對人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞Col Ⅰ A1 表達(dá)的影響。 方法 取患者自愿捐贈瘢痕組織，采用組織塊法培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞并傳代。于6 孔板內(nèi)按32.25 × 104 個/ 孔的密度接種第4 代細(xì)胞，根據(jù)轉(zhuǎn)染液不同分為4 組：A 組為脂質(zhì)體加Col Ⅰ A1 ASODN，B 組為Col Ⅰ A1 ASODN，C 組為脂質(zhì)體，D 組為空白對照。轉(zhuǎn)染后8 h，1、2、3、4 d 分別提取細(xì)胞總RNA，行RT-PCR 后測定Col Ⅰ A1 mRNA 表達(dá)量；胃酶消化法提取ECM 中Col Ⅰ A1 蛋白，ELISA 測定其濃度。 結(jié)果 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示條帶清晰，無雜帶、明顯的引物二聚體及拖尾現(xiàn)象。Col Ⅰ A1 mRNA 相對表達(dá)量：轉(zhuǎn)染后8 h，A 組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；轉(zhuǎn)染后1 d，A、B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），A、B 組間和C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05） ；轉(zhuǎn)染后2 d，各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；轉(zhuǎn)染后3、4 d，A 組小于B、C、D 組，B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），C、D 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。Col Ⅰ蛋白濃度：轉(zhuǎn)染后8 h，A組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），B、C 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（PP gt; 0.05）；轉(zhuǎn)染后1 d，各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；轉(zhuǎn)染后2、3、4 d，A、B 組小于C、D 組，C 組小于D 組（P lt; 0.05），A、B 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 Col Ⅰ A1 ASODN 抑制Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達(dá)；陽離子脂質(zhì)體作為載體有增強效果，促進(jìn)ASODN 進(jìn)入細(xì)胞并在核內(nèi)分布。