目的 以聚乳酸／聚羥基乙酸（poly-lactide-co-glycolide，PLGA）為載體，探討重組人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein 2, rhBMP-2）在關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)方面的作用及可行性。方法 將PLGA制成直徑4 mm，厚3 mm的圓柱形，與rhBMP-2復(fù)合（0.5 mg/塊），制備PLGA-rhBMP-2復(fù)合物。選取2月齡新西蘭兔，抽取骨髓行原代及傳代培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞密度為2×10.7/ml，與PLGA共培養(yǎng)24 h，制備PLGA細(xì)胞復(fù)合物。另取2月齡新西蘭兔72只，于雙側(cè)髕股關(guān)節(jié)股骨髁部制備直徑4 mm、深達(dá)髓腔的缺損。其中36只兔右側(cè)缺損處植入PLGA-rhBMP-2復(fù)合物，為實(shí)驗(yàn)組；左側(cè)植入PLGA，為單純載體組；另36只兔左側(cè)缺損不作任何處理，為空白對照組，右側(cè)缺損處植入PLGA-細(xì)胞復(fù)合物，作為細(xì)胞組。術(shù)后4、8、12、24、36和48周取材，行大體、組織學(xué)觀察以及組織學(xué)評分。結(jié)果術(shù)后動物均存活。術(shù)后4周，實(shí)驗(yàn)組和細(xì)胞組缺損內(nèi)被半透明組織填充，觸之柔軟，表面較光滑，軟骨細(xì)胞周圍基質(zhì)異染弱，新生軟骨厚度較正常軟骨厚；空白對照組和單純載體組未見明顯組織形成。8周，實(shí)驗(yàn)組和細(xì)胞組內(nèi)新生組織呈白色，半透明，質(zhì)較韌，表面平整，與周圍正常軟骨界限模糊；新生軟骨細(xì)胞分布均一，但仍較正常軟骨厚，PLGA已大部分降解，僅遺留少量顆粒；單純載體組和空白對照組缺損明顯，底部形成少量白色膜狀組織。12、24周，實(shí)驗(yàn)組和細(xì)胞組缺損內(nèi)完全充填白色半透明新生軟骨組織，質(zhì)韌，表面平整，與正常軟骨界限消失，厚度接近正常軟骨，與正常軟骨連接良好，表面細(xì)胞平行排列，深層有縱向排列的傾向，呈團(tuán)狀，陷窩形成，但有別于正常軟骨細(xì)胞；單純載體組和空白對照組缺損邊緣及底部形成少量軟骨細(xì)胞，大部分為纖維組織。 36、48周，實(shí)驗(yàn)組和細(xì)胞組新生軟骨組織色稍發(fā)白，表面連續(xù)，欠平整，與正常軟骨界限消失，未見滑膜增生; 新生軟骨厚度較正常軟骨薄，軟骨細(xì)胞周圍基質(zhì)異染較弱；單純載體組及空白對照組缺損仍存在，但較以前縮小，基底形成纖維組織，髁部可見部分軟骨面不平整、剝脫，部分軟骨下骨外露，滑膜增厚。組織學(xué)評分，實(shí)驗(yàn)組和細(xì)胞組術(shù)后12、24周分別與4、 8和48周比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；各時間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組、細(xì)胞組分別與單純載體組和空白對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），實(shí)驗(yàn)組與細(xì)胞組在各時間點(diǎn)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 PLGA-rhBMP-2復(fù)合物在降解過程中釋放出rhBMP-2，rhBMP-2作用于缺損局部的骨髓基質(zhì)細(xì)胞，誘導(dǎo)其向軟骨細(xì)胞分化，從而修復(fù)軟骨缺損；此方法簡便易行，有實(shí)用價值，有望成為治療軟骨缺損的一種新方法。
目的 觀察重組人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein 2，rhBMP-2）與骨誘導(dǎo)劑對SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 (mesenchymalstem cells, MSCs)的增殖與成骨作用。 方法 體外培養(yǎng)大鼠MSCs，分為實(shí)驗(yàn)組與對照組。對照組：不加rhBMP-2與骨誘導(dǎo)劑。實(shí)驗(yàn)組：骨誘導(dǎo)劑單獨(dú)作用于SD大鼠MSCs（A組）；rhBMP-2分別以濃度為10（B組）、50 (C組)、100 (D組)、200 μg/L (E組)單獨(dú)作用于SD大鼠MSCs；rhBMP-2分別以濃度為10 (F組)、50 (G組)、100 (H組)、200 μg/L(I組)聯(lián)合骨誘導(dǎo)劑作用于SD大鼠MSCs。測定第3、6、9、12天的增殖狀況（MTT法）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性和骨鈣素（osteocalcin,OC）水平。 結(jié)果 倒置相差顯微鏡觀察SD大鼠MSCs原代培養(yǎng)時，細(xì)胞接種12 h后即可貼壁；48 h細(xì)胞成梭形，形似成纖維細(xì)胞；4 d時細(xì)胞為多角形、紡錘形；6 d時，成纖維細(xì)胞散在分布，少量呈集落樣生長，為漩渦狀、放射狀排列；10 d左右，細(xì)胞基本鋪滿瓶底，融合成片。傳代細(xì)胞5～7 d即可長滿瓶底。各時間點(diǎn)A~I組均能顯著促進(jìn)MSCs成骨活性（ALP和OC）的表達(dá)。B~E組同時具有促進(jìn)MSCs 增殖作用，并呈濃度依賴性；F~I組增殖及ALP、OC含量均高于A~E組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 rhBMP-2與骨誘導(dǎo)劑聯(lián)合作用可在促進(jìn)MSCs增殖的同時提高其成骨活性。
目的 探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)分化為創(chuàng)面皮膚附屬器細(xì)胞的可能性，及其參與創(chuàng)面修復(fù)的可能機(jī)制。方法 無菌條件下取Wistar大鼠股骨骨髓細(xì)胞，密度梯度離心分離、純化MSCs，體外培養(yǎng)擴(kuò)增后，用BrdU標(biāo)記細(xì)胞。另于同種雄性Wistar大鼠背部正中,制備1 cm×1 cm全厚皮膚缺損創(chuàng)面模型,將BrdU標(biāo)記的1×106/ml MSCs從陰莖靜脈輸注，術(shù)后第3天與第7天切取創(chuàng)面組織，行BrdU免疫組織化學(xué)單染色，以及BrdU和廣譜角蛋白免疫組織化學(xué)雙染色。結(jié)果 BrdU陽性細(xì)胞出現(xiàn)在創(chuàng)面皮下組織、皮脂腺、毛囊和骨髓腔中。免疫組織化學(xué)雙染色結(jié)果顯示，皮脂腺和毛囊有BrdU陽性細(xì)胞，同時表達(dá)廣譜角蛋白。結(jié)論 創(chuàng)面愈合過程中, MSCs歸巢并參與創(chuàng)面修復(fù)；在實(shí)驗(yàn)性全身皮膚缺損創(chuàng)面微環(huán)境下, MSCs可分化為皮膚附屬器細(xì)胞。
目的 介紹近期國內(nèi)外脂肪組織來源的基質(zhì)細(xì)胞研究進(jìn)展。方法 廣泛查閱近期有關(guān)文獻(xiàn)，歸納分析此種細(xì)胞的培養(yǎng)和分化的研究狀況。結(jié)果 脂肪組織中存在一種多能的基質(zhì)細(xì)胞，體外培養(yǎng)條件下這種細(xì)胞生長狀態(tài)類似成纖維細(xì)胞，可長期增殖，細(xì)胞絕大多數(shù)為中胚層來源，混有少量的血管周細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，在一定的誘導(dǎo)條件下能分化為脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞。結(jié)論 脂肪組織來源的基質(zhì)細(xì)胞可替代間充質(zhì)干細(xì)胞作為組織工程的另一種干細(xì)胞。