目的探討前列腺素F2α受體(PTGFR)和前列腺素合酶2(COX-2)在膽管良性瘢痕組織中的表達及意義，并研究轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)對膽管成纖維細胞中PTGFR表達的影響。方法收集2008～2010年西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽外科收治的18例肝外膽管瘢痕性狹窄患者的膽總管組織，另收集6例來自異體肝移植供體的正常膽總管組織作為對照。采用免疫組織化學(xué)SABC法分別檢測PTGFR及COX-2在兩種組織中的表達情況，然后用不同濃度(0、10、20及30 ng/ml) TGF-β1作用于膽管成纖維細胞后24 h，用半定量RT-PCR法以及ELISA法檢測膽管成纖維細胞中PTGFR的mRNA及蛋白表達。結(jié)果PTGFR和COX-2在膽管良性瘢痕組織中的表達陽性率分別為88.9%(16/18)和83.3%(15/18)，正常膽總管組織中其表達陽性率分別為33.3%(2/6)及0(0/6)，PTGFR及COX-2在前者均分別明顯高于后者(Plt;0.05)。TGF-β1作用于膽管成纖維細胞后24 h，隨著TGF-β1濃度增高，可上調(diào)PTGFR mRNA及蛋白在膽管成纖維細胞中的表達，并且呈濃度依賴性(Plt;0.05)。結(jié)論膽管良性瘢痕組織中PTGFR和COX-2高度表達是造成膽管瘢痕過度增生的重要因素，TGF-β1可誘導(dǎo)膽管成纖維細胞中PTGFR的表達增高，并呈濃度依賴性，調(diào)節(jié)膽管瘢痕的形成。
目的 檢測TGF-β1及p27在原發(fā)性膽囊癌中的表達，研究其蛋白產(chǎn)物在原發(fā)性膽囊癌發(fā)生、發(fā)展過程中的表達特點及相互關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組化SP法檢測36例原發(fā)性膽囊癌中TGF-β1及p27的表達，并以同期20例慢性膽囊炎作對照。結(jié)果 36例原發(fā)性膽囊癌組織中23例TGF-β1基因蛋白產(chǎn)物呈陽性表達，表達陽性率為63.9%，高于對照組的10.0%（P＜0.05）； 17例p27蛋白陽性表達，表達陽性率為47.2%，顯著低于對照組的100%（P＜0.05）。TGF-β1在有淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移及Nevin Ⅳ～Ⅴ期患者中表達陽性率（均為79.1%）明顯高于無轉(zhuǎn)移及Nevin Ⅰ～Ⅲ期的患者（均為33.3%），P＜0.05； p27在高、中分化、無淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移及Nevin Ⅰ～Ⅲ期的患者中表達陽性率分別為60.9%、75.0%及75.0%，明顯高于低分化、有轉(zhuǎn)移及Nevin Ⅳ～Ⅴ期患者（23.0%、33.3%及33.3%），P＜0.05。 p27與TGF-β1表達兩者呈負相關(guān)(r=-0.447 3,P＜0.05)。 TGF-β1陽性患者生存率低于TGF-β1陰性患者，差異有顯著性意義（P＜0.05）； p27陽性患者生存率高于p27陰性患者，差異有顯著性意義（P＜0.05）。結(jié)論 在原發(fā)性膽囊癌細胞中TGF-β1表達上調(diào)，p27表達下調(diào)，且在有淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移及Nevin Ⅳ～Ⅴ期患者中更為明顯。
目的 探討整合蛋白α5β1和微血管密度在胃癌組織中表達的臨床意義及其相互關(guān)系。方法采用免疫組化SP法檢測了35例胃癌組織及其中10例胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶和8例慢性淺表性胃炎組織中整合蛋白α5β1的表達及微血管密度（MVD）。結(jié)果胃癌組織中整合蛋白α5β1表達水平及MVD均顯著高于慢性胃炎（t=3.32, P＜0.01； t=2.30, P＜0.05）； 胃癌原發(fā)灶中整合蛋白α5β1的表達僅與胃癌浸潤深度相關(guān)（t=2.29, P＜0.05），而MVD則與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移及TNM分期之間密切相關(guān)（t=3.07,P＜0.01; t=2.48,P＜0.05; t=2.94，P＜0.01）； 胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中整合蛋白α5β1表達水平較相應(yīng)的原發(fā)灶顯著增高（t=2.45, P＜0.05）； 整合蛋白α5β1的表達及MVD均與胃癌組織學(xué)分級無關(guān)（t=0.15,Pgt;0.05; t=0.41, Pgt;0.05）； 胃癌組織中整合蛋白α5β1不同表達水平間MVD的差異無顯著性意義（F=1.43, Pgt;0.05），相關(guān)性分析顯示兩者無顯著相關(guān)性（r=0.156, P=0.37）。 結(jié)論整合蛋白α5β1在胃癌組織中的表達顯著上調(diào)并與胃癌的進展有關(guān)，有可能成為判斷胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力的指標(biāo)及基因治療的靶標(biāo),其在胃癌血管生成中可能無重要作用。
目的 觀察阿魏酸鈉對肺纖維化大鼠肺組織轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）信號通路分子mRNA表達的影響，探討其防治肺纖維化的作用及機制。方法 氣管內(nèi)滴入博來霉素（5 mg/kg）建立大鼠肺纖維化模型。將30只SD大鼠隨機分為三組（每組10只）：對照組、肺纖維化模型組和阿魏酸鈉組。HE染色檢測肺組織病理改變，膠原纖維染色檢測膠原纖維表達，原位雜交技術(shù)檢測肺組織TGF-βRⅡ及Smad4 mRNA表達，實時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測TGF-β1 mRNA表達。結(jié)果 膠原纖維染色顯示模型組大鼠肺內(nèi)膠原纖維表達顯著高于對照組和阿魏酸鈉組（Plt;0.001）。大鼠肺內(nèi)TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4的mRNA表達在模型組顯著高于對照組（Plt;0.01），在阿魏酸鈉組顯著低于模型組（Plt;0.05）。結(jié)論 阿魏酸鈉能有效地減輕肺纖維化大鼠肺組織的纖維化程度，其作用機制主要是通過抑制TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4的mRNA表達上調(diào)，從而干擾TGF-β1/Smad4信號通路對靶基因的激活來實現(xiàn)的。
目的 探討γ干擾素（IFN-γ）對博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及其可能的機制。方法 75只SD雄性大鼠隨機分為健康對照組、肺纖維化模型組、地塞米松干預(yù)組、高劑量IFN-γ干預(yù)組與低劑量IFN-γ干預(yù)組，每組15只。各組隨機分別于7，14，28 d各處死5只，收集肺組織作切片行HE及Masson染色判斷肺組織肺泡炎及肺纖維化程度，行免疫組化染色測定肺組織轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、結(jié)締組織生長因子（CTGF）、Ⅰ型和Ⅲ型膠原的表達水平。結(jié)果 與模型組比較，3個干預(yù)組的肺泡炎及肺纖維化程度均明顯減輕（P均lt;0.05），肺組織TGF-β1、CTGF、Ⅰ型及Ⅲ型膠原的蛋白表達水平明顯降低（P均lt;0.05），其中高劑量IFN-γ干預(yù)組肺組織TGF-β1、Ⅰ型及Ⅲ型膠原的蛋白表達水平較低劑量干預(yù)組更為顯著（P均lt;0.05）。結(jié)論 IFN-γ具有與地塞米松相似的較強的抗纖維化效應(yīng)，且不良反應(yīng)更少。機制可能為通過抑制細胞因子TGF-β1、CTGF的表達而減少肺組織中Ⅰ型及Ⅲ型膠原的生成，最終抑制肺纖維化。
目的 研究姜黃素干預(yù)對實驗性肺間質(zhì)纖維化的治療作用及其可能的機制。方法 健康雄性SD大鼠96只，隨機分為正常對照組、模型組、潑尼松處理組和姜黃素處理組，每組24只。除正常對照組外，其余各組大鼠氣管內(nèi)一次性注入博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化。造模后第15 d起，姜黃素處理組和潑尼松處理組分別給予姜黃素（300 mg/kg）和潑尼松（5 mg/kg）每日灌胃一次，其余兩組每日給予1%羧甲基纖維素鈉（10 mL/kg）灌胃一次。各組動物分別于造模后第21，28，42及56 d隨機處死6只，取肺組織行HE、Masson染色評價肺組織病理變化，消化法測定肺組織羥脯氨酸（HYP）含量，免疫組化法測定肺組織轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）的表達。結(jié)果 姜黃素處理組肺纖維化程度于造模后第42和56 d顯著低于模型組（P均lt;0.05），其肺組織HYP含量在造模后第42和56 d時較模型組顯著降低（Plt;0.01），肺組織TGF-β1蛋白表達于造模后第28，42及56 d顯著低于模型組（P均lt;0.05），其中第56 d時與正常對照組比較無顯著差異（Pgt;0.05）。結(jié)論 在博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化形成階段應(yīng)用姜黃素干預(yù)能有效減輕肺纖維化程度，可能機制為姜黃素抑制了TGF-β1蛋白在肺組織的表達。
目的 研究過氧化氫對 A549 細胞表達轉(zhuǎn)化生長因子 β1 （ TGF-β1 ）和 Smad3 磷酸化的影響。方法 用過氧化氫建立體外A549細胞損傷模型，MTT法檢測過氧化氫對A549細胞增殖活性的影響，免疫印跡法（Western Blotting）觀察過氧化氫作用不同時間后A549細胞TGF-β1和Smad 3磷酸化的表達。結(jié)果 過氧化氫明顯抑制A549細胞的增殖，濃度為1.0 mmol/L時，其對A549細胞增殖的抑制率為46.34%；A549細胞在過氧化氫（1.0 mmol/L）的刺激下，TGF-β1和Smad3磷酸化的表達量逐漸升高，24 h時達到高峰, 48 h下降。結(jié)論 氧化損傷早期，A549細胞表達TGF-β1和Smad3磷酸化增加,這可能與肺損傷后依賴Smad3的組織修復(fù)有關(guān)。
目的 研究實驗性酸吸入致肺纖維化可能的作用機制。方法 健康雄性SD大鼠120只，隨機分為正常對照組、博來霉素組、高濃度鹽酸組、中濃度鹽酸組和低濃度鹽酸組，每組24只。博來霉素組氣管內(nèi)一次性注入博來霉素誘導(dǎo)纖維化，鹽酸組每周氣管內(nèi)滴注不同濃度鹽酸1次，正常對照組每周氣管內(nèi)滴注生理鹽水1次。各組分別于造模后第7、14、28及42 d隨機處死6只，取肺組織行HE、Masson染色評價肺組織病理變化，消化法測定肺組織羥脯氨酸（HYP）含量，分別采用RT-PCR和免疫組化法測定肺組織轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）的mRNA和蛋白表達。結(jié)果 鹽酸組肺泡炎程度始終顯著高于對照組（Plt;0.01），在開始2周內(nèi)達到一個高峰，隨后仍舊維持一個相對較高狀態(tài)，從28 d達到或者超過博來霉素組水平。鹽酸組纖維化程度隨時間逐漸增強，顯著高于對照組（Plt;0.01或0.05），但始終未超過博來霉素組；第42 d時高濃度和中濃度鹽酸組與博來霉素組纖維化程度無顯著差異（Pgt;0.05）；而低濃度鹽酸組纖維化程度與高、中濃度組相比，早期沒有顯著差異，自42 d起與高濃度鹽酸組有明顯差異（Plt;0.05）。高、中濃度鹽酸組肺組織HYP含量自14 d起始終顯著高于對照組（P均lt;0.05），但未超過博來霉素組；高濃度鹽酸組HYP含量在第42 d與博來霉素組無明顯差異，中、低濃度鹽酸組HYP含量始終低于博來霉素組（P均lt;0.05）。鹽酸組肺組織TGF-β1 mRNA在28 d時達到博來霉素組水平，至42 d時超過博來霉素組水平。鹽酸組TGF-β1表達水平從42 d起與博來霉素組無顯著性差異。結(jié)論 實驗性酸吸入可引起大鼠肺纖維化，比傳統(tǒng)的博來霉素造模方法更符合肺纖維化的病理生理過程。
目的 觀察香煙煙霧提取物( CSE) 對轉(zhuǎn)化生長因子β1 ( TGF-β1 ) 刺激的人肺成纖維細胞( HLF) 增殖及分泌過氧化氫( H2O2 ) 的影響, 探討CSE 可能參與肺纖維化發(fā)病的機制。方法 將體外分離培養(yǎng)的HLF 細胞分為對照組和TGF-β1 ( 5 ng/mL) 刺激組, 用不同濃度的CSE( 0% 、2. 5% 、5% 、10% ) 進行干預(yù)。應(yīng)用Brdu ELISA 法檢測細胞增殖; 熒光分光光度法測定細胞分泌的H2O2 ; 免疫熒光標(biāo)記分泌的H2O2 和細胞α-平滑肌肌動蛋白( α-SMA) 表達。結(jié)果 TGF-β1 刺激組細胞經(jīng)免疫熒光標(biāo)記顯示α-SMA 陽性表達, 說明HLF 在TGF-β1 刺激下轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞( MF) 。TGF-β1刺激組中, 與0% 濃度CSE 比較, 2. 5%、5% 濃度的CSE 干預(yù)可以顯著促進細胞增殖( P lt; 0. 01 或0. 05) , 10% 濃度的CSE 干預(yù)抑制細胞增殖( P lt;0. 01) 。對照組中, 與0% 濃度CSE 比較, 2. 5%、5% 、10% 濃度的CSE 均使細胞增殖顯著減弱( P lt;0. 01 或P lt;0. 05) , 并呈劑量依賴性。TGF-β1 刺激HLF細胞能產(chǎn)生一定量的H2O2, CSE 干預(yù)后分泌產(chǎn)生的H2O2 明顯增加( P lt; 0. 01) , 經(jīng)NADPH 氧化酶抑制劑二苯基碘( DPI) 預(yù)處理后檢測不到H2O2。免疫熒光標(biāo)記顯示分泌的H2O2 來源于α-SMA 陽性表達的MF 細胞。結(jié)論 低濃度的CSE 能夠促進TGF-β1 刺激HLF 細胞轉(zhuǎn)化的MF細胞增殖, 并顯著增加MF 細胞向細胞外分泌H2O2 , 提示CSE 可能通過氧化應(yīng)激參與肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展。
目的 研究支氣管哮喘模型小鼠肺組織及肺T 細胞中三種β1, 3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶( Fringe) RFNG、LFNG、MFNG 的基因和蛋白表達的特點, 探討Fringe 是否與哮喘發(fā)病有關(guān)。方法 使用卵白蛋白腹腔注射后霧化吸入法制備BALB/ c 小鼠哮喘模型, 并設(shè)置生理鹽水對照組。經(jīng)Perco1 及尼龍毛法分離獲取肺T 細胞。采用半定量RT-PCR 檢測兩組小鼠肺組織及肺T 細胞中RFNG、LFNG、MFNG mRNA 表達;Western blot 檢測兩組小鼠肺組織中RFNG、LFNG、MFNG 蛋白表達。結(jié)果 兩組小鼠肺組織及肺T 細胞中均存在三種Fringe 表達。哮喘組肺組織及肺T 細胞的RFNGmRNA 表達較對照組增加( 肺組織: 0. 92 ±0. 35 比0. 51 ±0. 13, Plt;0. 01; 肺T 細胞: 0. 33 ±0. 06 比0. 18 ±0. 07, Plt; 0. 01) ; LFNG mRNA 表達較對照組減少( 肺組織: 0. 77 ±0. 32 比1. 61 ±0. 31, Plt;0. 01; 肺T細胞: 0. 49 ±0. 19 比0. 71 ±0. 03, P lt;0. 01) 。MFNG 在肺組織中的表達無明顯差異( 肺組織: 1. 44 ±0. 29 比1. 70 ±0. 44, P gt; 0. 05) , 但MFNG 在肺T 細胞中的表達明顯減少( 0. 11 ±0. 03 比0. 52 ±0. 18, P lt; 0. 01) 。肺組織中三種Fringe 蛋白表達與肺組織的mRNA 結(jié)果相似。哮喘組的RFNG 蛋白表達高于對照組( 1. 17 ±0. 04 比0. 68 ±0. 07, P lt; 0. 05) , MFNG 蛋白表達在兩者之間沒有明顯的差異( 8. 10 ±0. 60 比9. 12 ±0. 07, P gt; 0. 05) , 而LFNG 的蛋白表達則低于對照組( 4. 11 ±0. 38比6. 41 ±0. 11, P lt;0. 05) 。結(jié)論 三種Fringe 的異常表達可能與支氣管哮喘的發(fā)病有關(guān)。