目的 表皮干細胞（epidermal stem cells，ESCs）能主動參與創(chuàng)面修復，促進創(chuàng)面再上皮化。建立糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）大鼠模型，觀察DM 大鼠皮膚中ESCs 增殖分化相關蛋白——角蛋白19（keratin19，K19）、β1整合素（β1-integrin）、β- 連環(huán)素（β-catenin）及增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的表達，探討DM大鼠皮膚創(chuàng)面難愈合的潛在機制。 方法 20 只雄性SD 大鼠，體重250 ～ 300 g，隨機分為DM 組和正常對照組，每組10 只。DM 組大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozocin，STZ，65 mg/kg）制備DM 大鼠模型，正常對照組不作處理。給藥后4 周取兩組大鼠胰腺組織，HE 染色觀察胰島組織學變化。取兩組動物背部全層皮膚，分離培養(yǎng)ESCs，取第2 代ESCs 行免疫細胞化學染色鑒定K19、β1-integrin、β-catenin 和PCNA 陽性表達，流式細胞儀檢測細胞周期，細胞接種1 周后檢測兩組細胞克隆形成率。 結果 DM 大鼠造模成功率為90%。DM 組胰腺HE 染色可見胰島細胞數(shù)明顯減少，出現(xiàn)變性壞死；正常對照組胰島細胞結構清楚，無變性壞死。DM 組大鼠ESCs 的K19、β1-integrin、β-catenin 及PCNA 陽性表達分別為82.63 ± 14.77、21.59 ± 4.71、76.49 ± 6.58、90.77 ± 12.44，均低于正常對照組的151.24 ± 42.83、54.48 ± 17.43、116.39 ± 9.26、110.62 ± 20.67，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。DM 組ESCs 克隆形成率為6.43% ± 1.01%，明顯低于正常對照組的11.37% ± 1.62%，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。流式細胞儀分析顯示DM 組88.89% 細胞處于G0/G1 期，凋亡細胞數(shù)為3.98%；正常對照組91.50% 細胞處于G0/ G1 期，無凋亡細胞。 結論 通過腹腔一次性注射65 mg/kg STZ 可有效建立DM 大鼠模型。DM 大鼠ESCs 數(shù)量少、增殖分化能力低可能是DM 創(chuàng)面難愈合的重要機制之一。
目的探討體外篩選及鑒定人角朊干細胞(KSC)的方法. 方法利用KSC對細胞外基質的快速黏附性,選擇不同時間黏附的細胞分為5、20和60分鐘3組,并以不進行篩選的細胞作對照組.體外培養(yǎng)擴增后,以KSC的相對特異性標識分子β1整合素、角蛋白19(Ck19)的單克隆抗體,免疫組織化學方法對各組細胞進行鑒定,利用圖像分析系統(tǒng)測平均灰度值.并用流式細胞儀、透射電鏡對各組細胞進行檢測. 結果各組細胞在10～14天均有克隆形成,組間比較5分鐘組細胞生長較慢,但形成克隆較大,細胞體積較小.免疫組織化學β1整合素、Ck19在各組都有表達,各組平均灰度值統(tǒng)計學分析顯示,β1整合素在5分鐘組的表達與另3組間有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05),Ck19的表達在5分鐘組與20分鐘組間無差異(Pgt;0.05),60分鐘組與對照組間差異不顯著,而前兩組與后兩組之間比較有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05).流式細胞儀檢測提示5分鐘組細胞大部分處于G1期,與其它3組有區(qū)別.透射電鏡顯示5分鐘組細胞體小,核漿比大,細胞器不成熟. 結論利用細胞外基質篩選的5分鐘組細胞處于幼稚狀態(tài),并有強克隆形成能力,符合預期的KSC特點,可利用KSC對細胞外基質的快速黏附性對其純化篩選,同時利用β1整合素、Ck19的單抗加以鑒定.