目的 構(gòu)建轉(zhuǎn)化生長因子 β3（transforming growth factor β3，TGF-β3）的腺病毒載體，并通過腺病毒載體將TGF-β3基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs），使其在細(xì)胞內(nèi)得到表達(dá)。方法 將人TGF--3質(zhì)粒定向克隆進(jìn)入穿梭質(zhì)粒pAdTrackCMV中，與pAdEasy1共同轉(zhuǎn)入細(xì)菌并重組，獲得TGF-β3重組腺病毒質(zhì)粒，用脂質(zhì)體法導(dǎo)入包裝細(xì)胞HEK293中，48～96 h后熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)。取1 月齡新西蘭大白兔5 只，取其脛骨骨髓。采用密度梯度離心法分離純化MSCs，并進(jìn)行傳代。取傳至第3代細(xì)胞采用TGF-β3腺病毒載體轉(zhuǎn)染，10 h后熒光顯微鏡觀察綠色熒光表達(dá)，轉(zhuǎn)染TGF-β3重組腺病毒4d后的MSCs用免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察TGF-β3在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。結(jié)果 pAdEasy-TGF-β3轉(zhuǎn)染 HEK293 細(xì)胞48~96 h后，熒光顯微鏡可見明顯的綠色熒光表達(dá)。 兔骨髓分離培養(yǎng)10 d 后，培養(yǎng)MSCs融合達(dá)70％~80%、貼壁緊密，細(xì)胞形態(tài)均一，似成纖維細(xì)胞；14 d 完成原代細(xì)胞培養(yǎng)。TGF-β3重組腺病毒轉(zhuǎn)染MSCs 17 h 后，熒光顯微鏡下出現(xiàn)少量綠色熒光，48~72 h 熒光加強(qiáng)，熒光與MSCs輪廓一致。免疫細(xì)胞化學(xué)觀察，轉(zhuǎn)染TGF-β3重組腺病毒MSCs胞漿內(nèi)有棕黃色陽性顆粒表達(dá)。結(jié)論 TGF-β3基因重組腺病毒載體的成功構(gòu)建并在MSCs內(nèi)的表達(dá)，為創(chuàng)傷愈合的基因治療提供了研究基礎(chǔ)。
引用本文： 邱林,金先慶,羅小輯,丁幸坡. 轉(zhuǎn)化生長因子β3基因轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實驗研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2006, 20(9): 940-943. doi: 復(fù)制
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