目的 通過基因工程手段從大鼠脊髓中獲取Nogo-66、NEP1-40基因并實(shí)現(xiàn)其蛋白的體外表達(dá)。 方法 從幼年大鼠的脊髓組織中，通過RT-PCR技術(shù)獲得Nogo-66、 NEP1-40基因，將目的基因通過基因連接反應(yīng)與T載體連接，重組質(zhì)粒進(jìn)行基因序列測序，構(gòu)建PQE30-GST和目的基因的高表達(dá)質(zhì)粒，異丙基βD硫代半乳糖(isopropylthiogalactoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)，Ni柱純化，Western-blot法檢測純化的目的蛋白。 結(jié)果 成功獲得大鼠Nogo-66、NEP1-40基因，加上兩端的酶切位點(diǎn)和保護(hù)性堿基，大小分別為215 bp和137 bp。序列測序顯示基因突變率為0，表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建雙酶切(BamH Ⅰ-和Hind Ⅲ)可見目的基因的條帶，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，獲得帶GST標(biāo)簽的融合蛋白Nogo-66和NEP1-40，相對分子質(zhì)量分別為33.2×103和30.3×103。蛋白純化結(jié)果理想，經(jīng)Westernblot分析證實(shí)抗原性正確。 結(jié)論 Nogo-66、NEP1-40蛋白可通過基因工程手段獲得體外高效表達(dá)，這將對其功能的研究及脊髓損傷疫苗的研究提供基礎(chǔ)。

引用本文： 宮福良,王坤正,余鵬博,黨曉謙,王春生,時志斌,楊佩. NEP1-40基因克隆及蛋白的原核表達(dá)和純化. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2006, 20(1): 9-12. doi: 復(fù)制