目的 比較全骨髓培養(yǎng)法和密度梯度離心法對hBMSCs 的分離效果。 方法 取健康成年人自愿捐贈的骨髓，分別采用全骨髓培養(yǎng)法和密度梯度離心法分離、培養(yǎng)hBMSCs 并進(jìn)行傳代。采用倒置相差顯微鏡觀察原代細(xì)胞形態(tài)變化；取第2 代細(xì)胞培養(yǎng)7 d 后行HE 染色；對比原代及第2、3 代細(xì)胞傳代時間；流式細(xì)胞儀檢測表面標(biāo)志物；并檢測細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)后3、6、9 d 的ALP 含量，于第9 天采用Kaplow 法染色觀察細(xì)胞ALP 染色情況。 結(jié)果 全骨髓培養(yǎng)法分離的原代細(xì)胞呈聚集樣生長，而密度梯度離心法分離的原代細(xì)胞呈單個、散在生長。HE 染色示兩種方法分離培養(yǎng)的第2 代細(xì)胞輪廓清晰，大小及形態(tài)均勻一致。全骨髓培養(yǎng)法原代細(xì)胞的傳代時間（15.36 ± 1.67） d；明顯快于密度梯度離心法的（18.57 ± 1.05）d，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；第2、3 代細(xì)胞的傳代時間兩種分離方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測，兩種方法培養(yǎng)的hBMSCs 上陽性表面標(biāo)志物CD29、CD44、CD71、CD105、CD166 含量和陰性表面標(biāo)志物CD34 含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05），陰性表面標(biāo)志物CD14、CD45 含量差異 有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）。兩種方法分離的第2 代細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)后各時間點ALP 含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；成骨誘導(dǎo)后第9 天ALP 染色程度基本一致。 結(jié)論 全骨髓培養(yǎng)法可分離出hBMSCs，其分離效果與密度梯度離心法相似。
引用本文： 黃謙,吳濤,梁杰,楊科躍,金丹. 全骨髓培養(yǎng)法和密度梯度離心法分離hBMSCs 的比較研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(11): 1360-1364. doi: 復(fù)制