目的 探討熒光染料PKH26 在構(gòu)建組織工程骨中作為細(xì)胞示蹤劑的可行性。 方法 取1 周齡新西蘭大白兔骨髓分離培養(yǎng)BMSCs，以PKH26 標(biāo)記第3 代BMSCs，熒光顯微鏡觀察并采用流式細(xì)胞儀檢測標(biāo)記率；以成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)標(biāo)記后BMSCs 向成骨細(xì)胞分化，倒置相差顯微鏡觀察誘導(dǎo)后7、14 d 細(xì)胞形態(tài)變化，并于14 d 采用鈣鈷法檢測ALP 活性，茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色觀察誘導(dǎo)結(jié)果。將PKH26 標(biāo)記的BMSCs 接種于生物衍生骨材料，48 h 后熒光顯微鏡觀察細(xì)胞與材料的復(fù)合情況；將細(xì)胞- 材料復(fù)合物植入成年新西蘭大白兔雙后肢肌袋，14、28 d 后熒光顯微鏡觀察標(biāo)記細(xì)胞的轉(zhuǎn)歸。 結(jié)果 熒光顯微鏡觀察PKH26 標(biāo)記的BM SCs 呈球形，呈現(xiàn)均勻分布的紅色熒光；培養(yǎng)24 h 后細(xì)胞貼壁伸展，輪廓清晰可見。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞染色陽性率達(dá)97.2%。經(jīng)成骨誘導(dǎo)后，細(xì)胞由長梭形變?yōu)槎噙呅位蛄⒎叫危珽CM 分泌增多，ALP 及茜素紅染色均呈陽性反應(yīng)。PKH26 標(biāo)記細(xì)胞與生物衍生骨材料復(fù)合培養(yǎng)48 h 后，熒光顯微鏡觀察可見材料表面及內(nèi)部發(fā)出紅色熒光。標(biāo)記細(xì)胞- 支架材料復(fù)合物植入肌袋后14 d，在植入?yún)^(qū)可見發(fā)出紅色明亮熒光的標(biāo)記細(xì)胞； 術(shù)后28 d，在植入?yún)^(qū)仍可見發(fā)出紅色熒光的細(xì)胞，但數(shù)量較14 d 時少，熒光強(qiáng)度也較弱。 結(jié)論 PKH26 標(biāo)記BMSCs 可作為一種體外構(gòu)建組織工程骨及短期體內(nèi)示蹤的有效手段。
引用本文： 張乃麗,馬洪強(qiáng),張育敏,李寶明,周沫,王旭昇,趙亞平,李寶興. PKH26 標(biāo)記BMSCs 示蹤技術(shù)在構(gòu)建組織工程骨中的應(yīng)用. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(10): 1246-1249. doi: 復(fù)制