目的 對乳豬竇房結(jié)所在部位進行準確定位，建立一套可靠的竇房結(jié)細胞取材、分離、純化培養(yǎng)技術(shù)；觀察竇房結(jié)細胞與Col Ⅰ纖維支架的相容性。 方 法 24 h 內(nèi)新生純種長白山乳豬5 只，雌雄不拘，體重0.45 ～ 0.55 kg。實驗動物采用多導(dǎo)電生理記錄儀標記房波最早出現(xiàn)的部位，在該位置取材行原代竇房結(jié)細胞培養(yǎng)，分別采用常規(guī)方法培養(yǎng)和差速貼壁分離技術(shù)、5-BrdU 處理純化培養(yǎng)；于左心房部位取材行心房肌細胞純化培養(yǎng)作為對照。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)、細胞貼壁時間、單細胞出現(xiàn)搏動時間、搏動頻率等。將純化培養(yǎng)的竇房結(jié)細胞以5 × 105 個/mL 密度接種至經(jīng)預(yù)濕處理的Col Ⅰ纖維支架復(fù)合培養(yǎng)5 d，行HE 染色觀察及掃描電鏡觀察。 結(jié)果 房波最早出現(xiàn)的位置即為竇房結(jié)所在部位。純化培養(yǎng)的竇房結(jié)細胞有3 種形態(tài)，即梭形、三角形與不規(guī)則形，其中梭形細胞最多；心房肌細胞主要為三角形及不規(guī)則形，而無梭形細胞。竇房結(jié)細胞純化培養(yǎng)與常規(guī)培養(yǎng)比較，梭形細胞所占比例分別為73.0% ± 2.9%、44.7% ± 2.3%，二者差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）；不規(guī)則形細胞分別為7.0% ± 1.7%、36.1% ± 2.6%，二者差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）；三角形細胞分別為20.0% ± 2.1%、19.2% ± 2.5%，二者差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。竇房結(jié)細胞復(fù)合Col Ⅰ纖維支架培養(yǎng)5 d，HE 染色觀察示Col Ⅰ纖維支架材料中有大量細胞；掃描電鏡見細胞成團吸附于支架表面及孔隙側(cè)壁，并可見細胞間通過突起相互連接，或伸出偽足貼附于支架孔隙壁上。 結(jié)論 通過準確竇房結(jié)定位，采用差速貼壁結(jié)合5-BrdU 處理的純化培養(yǎng)可明顯提高乳豬竇房結(jié)梭形細胞比例，是一種可靠的竇房結(jié)細胞純化培養(yǎng)技術(shù)。竇房結(jié)細胞和Col Ⅰ纖維支架有較好的細胞相容性。
引用本文： 萬居易,鐘曉琳,廖斌,王明勇,鄧明彬. 乳豬竇房結(jié)細胞原代培養(yǎng)及與Col Ⅰ纖維支架復(fù)合培養(yǎng)實驗研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(8): 980-984. doi: 復(fù)制