探討全反式維甲酸（all-trans-retinoic acid，ATRA）體外促神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cells，NSCs）分化為神經(jīng)元過程中Wnt-1 表達(dá)的變化，及Wnt-1 對(duì)NSCs 分化的作用。 方法 取孕12 ～ 16 d SD 大鼠，分離和培養(yǎng)鼠胚NSCs。取第3 代NSCs 調(diào)整密度為1 × 106 個(gè)/mL，分別用0.5、1.0、5.0、10.0 μmol/L 濃度的ATRA 干預(yù)，通過熒光雙標(biāo)染色技術(shù)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞神經(jīng)元分化率，確定1.0 μmol/L 濃度為ATRA 促NSCs 分化的最佳濃度。實(shí)驗(yàn)組用1.0 μmol/L ATRA 誘導(dǎo)體外培養(yǎng)第3 代NSCs，培養(yǎng)3、5、7、9 d 后用免疫細(xì)胞化學(xué)染色、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Westernblot 檢測(cè)Wnt-1 表達(dá)的變化；對(duì)照組不加ATRA 培養(yǎng)。 結(jié)果 免疫細(xì)胞化學(xué)染色示對(duì)照組Wnt-1 蛋白表達(dá)極少；實(shí)驗(yàn)組3 d 時(shí)表達(dá)最強(qiáng)，陽性細(xì)胞多；培養(yǎng)5 d 仍可見Wnt-1 陽性表達(dá)；3、5 d 時(shí)積分吸光度（IA）值與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；7、9 d Wnt-1 陽性表達(dá)明顯減少，IA 值與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)示對(duì)照組Wnt-1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量為0.021 7 ± 0.072 1；實(shí)驗(yàn)組相對(duì)表達(dá)量隨時(shí)間增加逐漸降低，3、5 d 時(shí)分別為0.512 2 ± 0.280 0、 0.216 4 ± 0.887 0，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05） ；7、9 d 分別為0.038 5 ± 0.299 4、0.035 5 ± 0.309 5，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。Western blot 印跡檢測(cè)可見特異染色條帶，對(duì)照組Wnt-1蛋白表達(dá)量為0.005 1 ± 0.558 3；實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量隨時(shí)間增加逐漸降低，3、5 d 時(shí)分別為0.451 7 ± 0.071 3、0.311 7 ± 0.080 5，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05） ；7、9 d 分別為0.007 3 ± 0.052 7、0.004 7 ± 0.931 4，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 在濃度為1.0 μmol/L 的ATRA 誘導(dǎo)下，Wnt-1 與NSCs 的分化早期成正調(diào)控，可能與激活包括經(jīng)典的Wnt 信號(hào)途徑等信號(hào)有關(guān)，表明Wnt-1 與NSCs 向神經(jīng)元的分化有關(guān)。
引用本文： 鐘德君,康敏,王清,張德勝,宋躍明. Wnt-1 在全反式維甲酸促鼠胚神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化中的作用. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(6): 742-746. doi: 復(fù)制
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