• 第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院全軍骨腫瘤研究所(西安,710038);

目的 研究嗅鞘細(xì)胞(olfactory ensheathing cells,OECs)培養(yǎng)液對(duì)正常及損傷脊髓神經(jīng)元的影響,進(jìn)一步探討OECs 促進(jìn)及保護(hù)脊髓神經(jīng)元的作用機(jī)制。 方法 取成年SD 大鼠OECs 制備OECs 培養(yǎng)液(OEC culturemedium,OECCM),倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),行兔抗大鼠低親和力神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體p75 抗體(nerve growth factorreceptor p75,NGFR p75)細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色觀察及純度計(jì)算。取孕15 ~ 17 d SD 大鼠制備脊髓神經(jīng)元,并以H2O2 制備損傷模型。觀察OECCM 對(duì)正常胚胎SD 大鼠脊髓神經(jīng)元生長(zhǎng)發(fā)育的影響實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(A 組)和實(shí)驗(yàn)組(B 組), OECCM 對(duì)H2O2 致脊髓神經(jīng)元損傷模型的影響實(shí)驗(yàn)也分為對(duì)照組(C 組)和實(shí)驗(yàn)組(D 組)。A、C 組每孔加200 μL 完全培養(yǎng)基,B、D 組每孔加100 μL OECCM 和100 μL 完全培養(yǎng)基。4 組細(xì)胞均作活性MTT 比色分析。 結(jié)果 OECs 培養(yǎng)6 ~ 9 d 后,細(xì)胞多呈雙極形或梭形;脊髓神經(jīng)元胞體較大,多呈圓形,培養(yǎng)5 ~ 7 d 后,突起明顯生長(zhǎng),多為雙突起。NGFRp75 細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色觀察示OECs 細(xì)胞膜棕色深染,胞體清晰,呈梭性或三角形;OECs 純度  gt; 90%。培養(yǎng)6 ~ 9 d 后,與A 組相比,B 組細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,密度較高,胞體明顯增大。A 組胞體平均直徑、單個(gè)神經(jīng)元突起數(shù)目及細(xì)胞突起長(zhǎng)度分別為(33.38 ± 6.80)D/μm、(1.67 ± 0.80)個(gè)和(91.19 ± 62.64)L/μm,B 組分別為(37.39 ± 7.28)D/μm、(1.76 ± 0.82)個(gè)和(121.33 ± 81.13) L/μm,兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P  lt; 0.05)。A 組MTT 比色法所測(cè)吸光度(A)值為0.402 0 ±0.586 9,B 組為0.466 0 ± 0.479 0,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P  lt; 0.01)。損傷后2 h,C、D 組細(xì)胞數(shù)量明顯減少,存活的神經(jīng)元胞體皺縮、胞膜不清楚,細(xì)胞突起明顯回縮或斷裂。C 組MTT 比色法所測(cè)A 值為0.149 0 ± 0.030 0,D 組為0.184 0 ±0.052 0,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P  lt; 0.01)。 結(jié)論 OECCM 可促進(jìn)正常脊髓神經(jīng)元生長(zhǎng),對(duì)損傷脊髓神經(jīng)元有一定保護(hù)作用,OECs 分泌的促神經(jīng)生長(zhǎng)因子是OECs 發(fā)揮脊髓神經(jīng)元保護(hù)作用的機(jī)制之一。

引用本文: 姬振偉,錢(qián)濟(jì)先,韓建偉,范清宇. 嗅鞘細(xì)胞對(duì)正常及損傷脊髓神經(jīng)元的保護(hù)作用. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(1): 21-25. doi: 復(fù)制