目的 為解決組織工程中種子細(xì)胞數(shù)量不足及為組織工程種子細(xì)胞研究提供標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞，建立永生化hBMSCs（MSCxj）系，進(jìn)一步探討MSCxj 的異位成骨能力。 方法 取凍存復(fù)蘇后生長(zhǎng)良好的第35 代和第128 代MSCxj，擴(kuò)增培養(yǎng)至2 109 個(gè)，分別與牛松質(zhì)骨復(fù)合培養(yǎng)，作為A、B 組（n=12），C 組為單純牛松質(zhì)骨（n=12）。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)48 h 和18 d 時(shí)行掃描電鏡觀察細(xì)胞在材料上的生長(zhǎng)情況。于18 只4 ～ 6 周齡裸鼠背部?jī)蓚?cè)皮下各作一3 mm小切口，將3 組共36 個(gè)標(biāo)本采用組內(nèi)隨機(jī)、組間兩兩配對(duì)分別植入切口內(nèi)。處死動(dòng)物前分別行四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記。于術(shù)后4、8、12周各組分別取4 個(gè)標(biāo)本行HE、麗春紅三色、四環(huán)素?zé)晒馊旧?、鼠抗人骨鈣素單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色觀察，并行形態(tài)學(xué)定量分析。 結(jié)果 細(xì)胞- 異種骨復(fù)合培養(yǎng)48 h，掃描電鏡觀察見(jiàn)A、B 組細(xì)胞貼附生長(zhǎng)良好；18 d 可見(jiàn)大量合成的絲狀細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)小顆粒樣分泌物，并覆蓋細(xì)胞。裸鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)：HE、麗春紅三色、四環(huán)素?zé)晒馊旧^察示，術(shù)后4 周A、B 組標(biāo)本成骨不明顯，8 周A、B 組標(biāo)本周邊及異種骨內(nèi)部孔隙有類(lèi)骨基質(zhì)沉積，12 周A、B 組標(biāo)本成骨增加，A、B 組間成骨情況比較無(wú)明顯差異；C 組各時(shí)間點(diǎn)均未見(jiàn)骨質(zhì)形成。鼠抗人骨鈣素單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色顯示，A、B 組8 周及12 周骨陷窩內(nèi)骨鈣素染色呈陽(yáng)性。形態(tài)學(xué)定量分析顯示，術(shù)后8 周A、B組骨長(zhǎng)入率分別為5.64% ± 2.68%和4.92% ± 2.95%，術(shù)后12 周分別為13.94% ± 2.21% 和14.34% ± 3.46%，兩組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；組內(nèi)術(shù)后12周骨長(zhǎng)入率均高于術(shù)后8 周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 MSCxj 與原代培養(yǎng)hBMSCs 一樣具有良好的異位成骨能力，可作為骨組織工程的種子細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)及臨床研究。
引用本文： 滕勇,胡蘊(yùn)玉,李旭升,王臻,白建萍,關(guān)玉成. 永生化hBMSCs 復(fù)合異種骨異位成骨. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(12): 1515-1519. doi: 復(fù)制
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