目的 脂肪來(lái)源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）是組織工程種子細(xì)胞的重要來(lái)源之一。探討低溫保存對(duì)hADSCs 體外生長(zhǎng)特性及成骨分化潛能的影響，驗(yàn)證凍存后的ADSCs 作為組織工程骨種子細(xì)胞的可行性。 方法 取自愿捐獻(xiàn)的經(jīng)脂肪抽吸術(shù)獲取人脂肪組織，采用膠原酶消化法分離hADSCs。取第2 代hADSCs 置于— 196℃液氮保存4 周后，37℃復(fù)蘇并測(cè)定細(xì)胞存活率。實(shí)驗(yàn)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組為低溫保存的hADSCs，對(duì)照組為未經(jīng)低溫保存的hADSCs；均用成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng)。采用DNA 定量（Hoechst33258 熒光比色法）測(cè)定細(xì)胞體外增殖活性，ALP 染色及茜素紅染色法測(cè)定ALP 活性和Ca2+ 含量，觀察低溫凍存對(duì)細(xì)胞成骨能力的影響。 結(jié)果 低溫凍存復(fù)蘇后的hADSCs 存活率為90.44% ± 2.62%。兩組細(xì)胞數(shù)量隨成骨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)不斷增加，7 d 達(dá)平臺(tái)期；ALP 表達(dá)活性也不斷增加，于成骨誘導(dǎo)11 d 達(dá)平臺(tái)期，且2 周時(shí)ALP 染色均呈陽(yáng)性；成骨誘導(dǎo)3 周時(shí)兩組茜素紅染色均呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)。兩組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞數(shù)量、ALP 活性和Ca2+ 含量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 低溫保存的hADSCs 體外生長(zhǎng)及成骨能力未發(fā)生顯著變化，可以作為組織工程骨的種子細(xì)胞。
引用本文： 劉廣鵬,李宇琳,孫劍,周恒,崔磊. 低溫凍存對(duì)人脂肪來(lái)源干細(xì)胞成骨能力影響的實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(10): 1224-1227. doi: 復(fù)制
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