目的 采用單層分步法誘導人胚胎干細胞（human embryonic stem cells，hESCs）分化為肝樣細胞，建立hESCs 分化為肝細胞的誘導體系。 方法 將hESC 株H1 細胞接種到Matrigel 包被的培養(yǎng)板上，早期（細胞貼壁4 d 后）加入含有細胞因子活化素A（Activin A）的分化液誘導5 d；中期將誘導液換為含F(xiàn)GF-1 和BMP-4 的肝分化液誘導6 d；最后添加肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）和制癌蛋白M（Oncostatin M，OSM）繼續(xù)誘導分化5 ～ 7 d。采用免疫細胞化學染色、RT-PCR、過碘酸- 雪夫（Periodicacid-Schiff，PAS）反應鑒定分化細胞的性質(zhì)。 結(jié)果 經(jīng)ActivinA、FGF-1、BMP-4、HGF 和OSM 連續(xù)誘導的hESCs 呈多角形、卵圓形或圓形，排列緊密；部分細胞出現(xiàn)二核或三核，呈現(xiàn)肝細胞所特有的形態(tài)。分化細胞在誘導早期表達SOX17、叉頭框（Forkhead box，F(xiàn)OX）A2、GATA-4，中期表達甲胎蛋白（αfetoprotein，AFP）、白蛋白、角蛋白18，晚期表達成熟肝細胞特異性基因乙醇脫氫酶1C、細胞色素P4501B1。免疫細胞化學染色示，Activin A 誘導后，細胞呈SOX17 和FOXA2 陽性；經(jīng)FGF-1 和BMP-4 誘導后，呈AFP 和α1 抗胰蛋白酶陽性。HGF 和OSM 誘導后，PAS 糖原染色檢測陽性。 結(jié)論 采用單層分步法逐步添加細胞因子，可誘導hESCs 分化為肝樣細胞。該分化體系可為肝細胞移植、肝組織工程等臨床治療提供一個有效的細胞來源。
引用本文： 胡智興,羅敏,梁道明. 單層分步法誘導人胚胎干細胞定向肝樣細胞分化. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(7): 838-842. doi: 復制