目的 觀察PKH26 與BrdU 體外雙重標記兔BMSCs 的生物學特性，并體外構(gòu)建組織工程心肌補片。 方法 取6 月齡新西蘭大白兔分離培養(yǎng)BMSCs，并用細胞膜熒光染料PKH26 和細胞核標記物BrdU 對BMSCs 進行標記，通過倒置相差顯微鏡、熒光顯微鏡、流式細胞儀、MTT 法觀察細胞生長狀態(tài)和熒光標記前后細胞生物學特性的變化；ALP、茜素紅、油紅O 染色及骨鈣素、Ⅰ型膠原蛋白等免疫細胞化學技術(shù)檢測，觀察和評價標記前后BMSCs 體外分化為成骨細胞和成脂細胞的能力。將標記細胞與小腸黏膜下層（small intestinal submucosa，SIS）復合后共培養(yǎng)5 ～ 7 d 構(gòu)建組織工程心肌補片，在倒置相差顯微鏡、熒光顯微鏡和掃描電鏡下觀察細胞在SIS 上的生長情況，并做活體及石蠟包埋HE 染色觀察。 結(jié)果 標記后細胞生長狀態(tài)良好，基本生長特性無明顯改變；熒光顯微鏡下可見標記后細胞膜上紅色熒光呈顆粒狀分布；細胞表面干細胞標志性抗原表達與標記前無明顯差異。標記后的BMSCs 成骨誘導后，ALP、茜素紅染色陽性，細胞表達骨鈣素及Ⅰ型膠原蛋白；成脂誘導后，細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)明顯的脂滴。標記細胞與SIS 共培養(yǎng)5 ～ 7 d 后，標記細胞生長狀態(tài)良好，在材料上呈現(xiàn)出多層細胞結(jié)構(gòu)。活體及石蠟包埋后HE 染色可見細胞生長狀態(tài)良好。 結(jié)論 兔BMSCs 能被PKH26 和BrdU 穩(wěn)定標記；標記的細胞在體外具有自我更新和多向分化的能力；標記的BMSCs 與SIS 體外復合培養(yǎng)可以構(gòu)建組織工程心肌補片。
引用本文： 張玨,智偉,譚美云,陳曉禾,李秀群,鄧力. PKH26 與BrdU 體外雙重標記兔BMSCs 在心肌補片中的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(7): 828-833. doi: 復制