目的 研究殼聚糖 - 藻酸鹽支架復(fù)合 BMSCs 構(gòu)建組織工程脊髓，橋接大鼠脊髓半橫斷損傷斷端，促進(jìn)急性脊髓損傷（spinal cord injury， SCI）修復(fù)的作用。? 方法? 取 1 只成年雄性 SD 大鼠骨髓，分離、培養(yǎng) BMSCs。采用冷凍干燥法制備殼聚糖 - 藻酸鹽支架，掃描電鏡觀察結(jié)構(gòu)，用浸提液實(shí)驗(yàn)檢測(cè)毒性。將支架材料與第 2 代 BMSCs 以細(xì)胞密度 1 × 106個(gè) /mL 體外復(fù)合培養(yǎng)制備組織工程脊髓，于培養(yǎng)后 1、 3、 5 d 掃描電鏡觀察其生物相容性。取成年雌性 SD 大鼠
40 只制備急性脊髓 T9 半橫斷損傷模型，根據(jù)修復(fù)方法不同隨機(jī)將大鼠分為 4 組（n=10）。A 組于損傷區(qū)植入組織工程脊
髓， B 組植入單純支架， C 組植入 20 μL 1 × 107個(gè) /mL BMSCs， D 組直接縫合硬膜作為空白對(duì)照。術(shù)后 1、 2、 4、 6 周采用Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）評(píng)分評(píng)價(jià)大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能；術(shù)后 6 周取材行麥芽凝集素 - 辣根過氧化物酶（wheat germ agglutinin-horseradish peroxidase，WGA-HRP）神經(jīng)逆行示蹤檢測(cè)、 HE 染色和免疫熒光染色檢測(cè)。? 結(jié)?果 掃描電鏡觀察示殼聚糖 - 藻酸鹽支架呈三維多孔海綿樣結(jié)構(gòu)。浸提液實(shí)驗(yàn)顯示支架材料的細(xì)胞毒性等級(jí)為 0 ～ 1 級(jí)。掃描電鏡觀察示 BMSCs 與支架材料復(fù)合培養(yǎng) 3 d 后即可黏附于支架材料表面，細(xì)胞呈一定方向排列。術(shù)后 2、 4、 6 周 A 組 BBB 評(píng)分均明顯高于其余各組，D 組明顯低于其余各組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）； B 組術(shù)后 4、6 周高于 C 組（P lt; 0.05）。術(shù)后 6 周，各組 WGA-HRP 神經(jīng)逆行示蹤檢測(cè)示陽性神經(jīng)纖維均未能穿過脊髓斷端。HE 染色與免疫熒光染色顯示 A 組宿主脊髓與組織工程脊髓連接緊密，損傷區(qū)內(nèi)無明顯瘢痕組織長入，有較多神經(jīng)絲蛋白 200（neuroflament 200，NF-200）陽性細(xì)胞發(fā)生的神經(jīng)纖維及神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron specifc enolase， NSE）陽性神經(jīng)元樣細(xì)胞； B 組支架植入外周可見成纖維細(xì)胞形成的瘢痕組織以及少量侵入尚未降解的支架材料；交界區(qū)可見少量 NSE、NF-200 陽性細(xì)胞； C、D 組脊髓斷端見瘢痕組織填充， D組脊髓損傷周邊有空洞形成，兩組均未見明顯NSE、 NF-200陽性神經(jīng)元樣細(xì)胞。? 結(jié)?論 殼聚糖-藻酸鹽支架與 BMSCs 復(fù)合構(gòu)建的組織工程脊髓對(duì)大鼠急性 SCI 修復(fù)有促進(jìn)作用，是一種具有潛在應(yīng)用前景的支架材料。
引用本文： 汪大彬,文益民,藍(lán)旭,李輝映. 殼聚糖 - 藻酸鹽支架復(fù)合 BMSCs 修復(fù)急性脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(2): 190-196. doi: 復(fù)制