• 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(青島,266000)1 關(guān)節(jié)外科,2 查體中心,3 中心實(shí)驗(yàn)室;

目的 探討血小板裂解液(platelet lysate,PL)在體外定向誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,hUCMSCs)分化成軟骨細(xì)胞中的作用。 方法 取健康產(chǎn)婦自愿捐贈(zèng)臍帶,采用膠原酶消化法分離hUCMSCs,體外培養(yǎng)擴(kuò)增,流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定。根據(jù)加入誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分不同將實(shí)驗(yàn)分為以下3 組:A 組為H-DMEM 培養(yǎng)基、10%FBS 及10%PL,B 組為H-DMEM 培養(yǎng)基、10%FBS、10 ng/mL TGF-β1、1 ×10-7 mol/L 地塞米松、50 μg/mL 維生素C 及1% 胰島素鐵硒傳遞蛋白(insulin-transferrin-selenium,ITS),C 組為 H-DMEM培養(yǎng)基、10%FBS、10 ng/mL TGF-β1、1 × 10-7 mol/L 地塞米松、50 μg/mL 維生素C、1%ITS 及10%PL。誘導(dǎo)培養(yǎng)2 周,甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞基質(zhì)的分泌,免疫熒光檢測(cè)軟骨特異性Ⅱ型膠原表達(dá),半定量RT-PCR 檢測(cè)蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型膠原表達(dá)。 結(jié)果 分離得到的hUCMSCs 不表達(dá)造血細(xì)胞的表面標(biāo)記CD45、CD34 和HLA-DR,而表達(dá)黏附分子和MSCs 表面標(biāo)記CD44、CD105 和CD146。甲苯胺藍(lán)染色和Ⅱ型膠原免疫熒光染色示C 組呈陽(yáng)性,B 組呈弱陽(yáng)性,而A 組均呈陰性。半定量RT-PCR 檢測(cè)示Aggrecan 和Ⅱ型膠原在B、C 組中均有表達(dá),A 組中未見表達(dá);C 組Aggrecan mRNA 和Ⅱ型膠原mRNA 表達(dá)明顯高于B 組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P  lt; 0.05)。 結(jié)論 單純10%PL 不能誘導(dǎo)hUCMSCs 成軟骨分化,但它可當(dāng)作成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基的輔助添加劑,對(duì)hUCMSCs 成軟骨分化有明顯促進(jìn)作用,為構(gòu)建組織工程軟骨提供了新的可利用條件。

引用本文: 馮學(xué)濤,田少奇,孫康,張積華,張才龍,劉世海,周明,呂江濤. 血小板裂解液對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外成軟骨分化的影響. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2011, 25(10): 1250-1255. doi: 復(fù)制