目的構(gòu)建抑制大鼠心肌細(xì)胞kir2．1基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP6-kir2．1，觀察對大鼠心肌細(xì)胞kir2．1信使RNA（mRNA）、蛋白表達(dá)情況及搏動頻率的影響。方法選擇5個針對大鼠心肌細(xì)胞kir2．1基因的RNA干擾（RNA interference）位點(diǎn)，設(shè)計合成5對相應(yīng)的寡核苷酸鏈，形成雙鏈后依次將其連人帶有U6啟動子的載體，得到含5個目的基因的重組質(zhì)粒pEGFP6-kir2．1。轉(zhuǎn)染大鼠心肌細(xì)胞，并將其分為3組：實驗組、陰性質(zhì)粒對照組和空白對照組。轉(zhuǎn)染后72h，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT—PCR）和蛋白印跡法（Western—blotting）檢測kir2．1mRNA和蛋白表達(dá)情況，并觀察細(xì)胞搏動頻率。結(jié)果轉(zhuǎn)染后72h，實驗組心肌細(xì)胞kir2．1mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于兩對照組（P〈0．01），兩對照組間比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組搏動頻率增加，并顯著高于兩對照組（P〈0．01），兩對照組之間搏動頻率差別無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP6-kir2．1能明顯抑制大鼠kir2．1基因的表達(dá)，提高大鼠心肌細(xì)胞的自律性。

引用本文： 李凡東,雷印勝,鄒承偉,等. 質(zhì)粒介導(dǎo)shRNA對心肌細(xì)胞kir2．1蛋白表達(dá)和搏動頻率的影響. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2006, 13(1): 28-31. doi: 復(fù)制