目的 在支氣管哮喘大鼠模型中采用siRNA 干擾肺CD4 + T 細(xì)胞β1, 3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶( Fringe) 亞型Rfng 基因的表達(dá), 探討Rfng 對(duì)哮喘T細(xì)胞分化的影響。
方法 用卵白蛋白( OVA)致敏并激發(fā)建立哮喘大鼠模型。提取哮喘大鼠肺T 細(xì)胞, 并用免疫磁珠分離純化CD4 + T淋巴細(xì)胞。用Rfng 特異的siRNA 片段干擾哮喘大鼠CD4 + T 淋巴細(xì)胞高表達(dá)的Rfng 基因。定量PCR 和Westernblot 檢測(cè)Rfng 的表達(dá)。定量PCR 檢測(cè)Th1/Th2 型細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5, 以及核轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3。ELISA 檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Th1 /Th2 型細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5。
結(jié)果 siRNA干擾哮喘大鼠肺CD4 + T 淋巴細(xì)胞后, 定量PCR 和Western blot 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)siRNA 干預(yù)組中RfngmRNA 和蛋白表達(dá)明顯降低。在siRNA 干預(yù)組中, Th1 型細(xì)胞因子IFN-γ、IL-12 以及上游核轉(zhuǎn)錄因子T-bet 的mRNA 表達(dá)明顯升高, Th2 型細(xì)胞因子IL-4、IL-5 以及上游核轉(zhuǎn)錄因子GATA3 的mRNA 表達(dá)明顯降低。ELISA 檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-12 明顯升高, IL-4、IL-5 明顯降低。
結(jié)論 Rfng基因表達(dá)的改變影響了T細(xì)胞的分化, 可能與支氣管哮喘的發(fā)病有關(guān)。
引用本文： 顧問,郭雪君,丁濤. SiRNA干擾Notch 信號(hào)通路胞外分子β1,3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶對(duì)哮喘時(shí)T細(xì)胞分化的影響. 中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志, 2011, 10(4): 325-330. doi: 復(fù)制