引用本文： 刘丽红, 郭文才, 周江, 李小波. ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析. 中国循证医学杂志, 2015, 15(2): 170-175. doi: 10.7507/1672-2531.20150030 复制
哮喘是呼吸系统常见病和多发病，其发生受遗传因素和环境因素的多重影响 [1-3]。至今，哮喘的遗传相关基因已超过200个以上。近年来，大量研究证实ORMDL3基因是哮喘的易感基因之一 [4-7]。ORMDL3基因位于染色体17q21上，大小为6 560 bp，包含3个外显子，其编码由153个氨基酸构成的内质网跨膜蛋白。ORMDL3蛋白在人体中广泛分布，尤其在肝脏、胰腺、肺、肾脏和脾中高度表达。已有研究证实，ORMDL3蛋白可调节由内质网介导的Ca2+信号传导及细胞压力，从而导致未折叠蛋白反应，进而成为炎症发生的内源性诱因 [7]。此外，脂质作为细胞膜主要组成之一，参与细胞增殖、信号传导和细胞凋亡等。ORMDL3的表达异常可能引起脂质代谢紊乱而致哮喘的发生，但其具体机制未见报道。已有研究证实ORMDL3基因rs7216389多态性与哮喘发病风险密切相关 [8-14]，但在中国人中的研究目前仍无统一结论。本研究旨在对ORMDL3基因rs7216389多态性与中国人哮喘发病风险相关的研究进行系统评价和Meta分析，以期为其应用提供循证医学证据。
1 资料与方法
1.1 纳入与排除标准
1.1.1 研究类型
病例-对照研究。文种限中、英文。
1.1.2 研究对象
基于中国人的研究，经临床明确诊断为哮喘。
1.1.3 暴露因素
ORMDL3基因rs7216389多态性。
1.1.4 结局指标
哮喘的发病风险。
1.1.5 排除标准
① 重复发表的文献；② 原始研究数据无法提取；③ 摘要、综述等；④ 对照组基因型频率分布不符合哈迪温拍格平衡（HWE）。
1.2 检索策略
计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library（2014年第8期）、CBM、CNKI、VIP和WanFang Data，并追溯纳入文献的参考文献，查找国内外关于ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘相关性的病例-对照研究，检索时限均为从建库至2014年8月。采用主题词与自由词相结合的方式进行检索。中文检索词包括哮喘、多态性、ORMDL3基因；英文检索词包括asthma、polymorphism、ORMDL3、China、Chinese。以PubMed为例，其具体检索策略见框1。
框 1 PubMed检索策略
#1 asthma #2 polymorphism #3 ORMDL3 #4 China OR Chinese #5 #1 AND #2 AND #3 AND #4
1.3 文献筛选、资料提取与质量评价
由2位研究者按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料和评价纳入研究的方法学质量，如遇分歧则讨论解决。采用自制的资料提取表提取资料，提取内容主要包括第一作者、发表时间、国家、种族、基因分型方法、病例组和对照组突变基因的频率。纳入研究的方法学质量采用NOS量表（Newcastle-Ottawa Scale） [15]进行评价。
1.4 统计分析
采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。采用OR值及其95%CI为效应分析统计量，以显性模型（CC+TC vs. TT）和隐性模型（CC vs. TT+TC）为代表进行统计分析。异质性检验采用Q检验，检验水准α=0.1，同时结合I2值对异质性进行定量分析。若P≥ 0.1且I2≤ 50%时，提示各研究结果间无统计学异质性，采用固定效应模型进行Meta分析；若P＜0.1和/或I2＞50%时，提示各研究结果间存在统计学异质性 [16]，采用随机效应模型进行Meta分析，并对可能导致异质性的因素（如按年龄分为成人哮喘和儿童哮喘）进行亚组分析 [17]。发表偏倚采用Stata 11.0软件进行检测。Meta分析的检验水准为α=0.05。
2 结果
2.1 文献检索结果
初检出相关文献121篇，经逐层筛选后，最终纳入7个病例-对照研究 [8-14]，合计1 711例哮喘患者，1 763例对照。文献筛选流程及结果见图 1。
图1
文献筛选流程及结果
2.2 纳入研究的基本特征与质量评价
纳入研究的基本特征见表 1，其中3个研究的研究对象是成人哮喘患者，4个研究的对象是儿童哮喘。纳入研究的方法学质量评价结果见表 2。
表1
纳入研究的基本特征
表2
纳入研究的方法学质量评价
2.3 Meta分析结果
2.3.1 显性模型
共纳入哮喘组1 711例，对照组1 763例。固定效应模型Meta分析结果显示，ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘发病风险有相关性[OR=0.71，95%CI（0.62，0.81），P＜0.000 01]（图 2）。Begg’s漏斗图显示各研究在漏斗两侧的分布基本对称，Egger’s检验结果显示t= -1.09，P=0.326，提示不存在发表偏倚（图 3）。按年龄进行亚组分析，结果显示，ORMDL3基因rs72l6389多态性与成人哮喘[OR=0.71，95%CI（0.61，0.83），P＜0.000 1]和儿童哮喘[OR=0.69，95%CI（0.52，0.90），P=0.006]发病均具有相关性（图 4）。
图2
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析（CC+TC vs. TT）：总体分析
图3
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析的发表偏倚（CC+TC vs. TT）
图4
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析（CC+TC vs. TT）：亚组分析
2.3.2 隐性模型
共纳入哮喘组1 711例，对照组1 763例。固定效应模型Meta分析结果显示，ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘发病风险无有相关性[OR=0.80，95%CI（0.62，1.02），P=0.07]（图 5）。Begg’s漏斗图显示各研究在漏斗两侧的分布基本对称，Egger’s检验结果显示t= -1.50，P=0.193，提示不存在发表偏倚（图 6）。按年龄进行亚组分析，结果显示，ORMDL3基因rs72l6389多态性与成人哮喘[OR=0.95，95%CI（0.72，1.26），P=0.72]不相关，但是与儿童哮喘[OR=0.45，95%CI（0.27，0.76），P=0.003]发病具有相关性（图 7）。
图5
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析（CC vs. TT+TC）：总体分析
图6
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析的发表偏倚（CC vs. TT+TC）
图7
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析（CC vs. TT+TC）：亚组分析
3 讨论
随着环境污染日益加重，中国人哮喘的发病率呈逐年上升的趋势 [18-20]。关于中国人哮喘基因易感性的研究，目前主要的手段有核心家系和病例-对照两种。已有不少研究证实ORMDL3基因rs7216389多态性与中国人哮喘的发病相关，但由于单个研究纳入研究对象较少，研究手段单一，检验效能低，因此无法得出确切的结论，需要更为有力的检验手段来进行研究。Meta分析则将研究同一目的的所有数据进行汇总，增大样本量，增大检验效能，得出更为可靠的结论。因此，本研究使用Meta分析的方法对所有有关ORMDL3基因rs7216389多态性与中国人哮喘相关的文献进行分析，以期待得到更可靠的结论。
本研究共纳入7个对中国人中ORMDL3基因rs7216389 多态性与哮喘的易感性研究进行Meta分析。研究发现，显性模型总体合并效应结果为[OR=0.71，95%CI（0.62，0.81），P＜0.000 01]。这提示该多态性与中国人哮喘发病机制具有相关性，该多态性为哮喘发病风险的保护因子。有研究报道，哮喘的发生与年龄、性别、环境因素等多种因素密切相关。在本研究中，我们按照年龄进行了亚组分析，相关结果提示该多态性不仅与成人哮喘相关，而且也与儿童哮喘相关，提示该多态性是哮喘发病机制中重要的关键因子。
本研究的局限性：首先，由于检索的文献均为正式刊物上发表的文章，因此，不排除有未发表的研究未被纳入，这可能带来一定的偏倚。其次，本研究仅对年龄进行了亚组分析，但未对其他环境因素进行亚组分析。第三，本研究仅研究了1个基因的多态性，未考虑基因与基因的相关关系。尽管如此，本研究严格按Meta分析的相关要求进行操作，将各种影响因素降到最小，以保证本研究结论的准确可靠。
总之，本研究发现，ORMDL3基因rs7216389多态性与中国人儿童和成人哮喘发病均密切相关。将来需要纳入更多研究，进一步阐明其在哮喘发病中的作用。
哮喘是呼吸系统常见病和多发病，其发生受遗传因素和环境因素的多重影响 [1-3]。至今，哮喘的遗传相关基因已超过200个以上。近年来，大量研究证实ORMDL3基因是哮喘的易感基因之一 [4-7]。ORMDL3基因位于染色体17q21上，大小为6 560 bp，包含3个外显子，其编码由153个氨基酸构成的内质网跨膜蛋白。ORMDL3蛋白在人体中广泛分布，尤其在肝脏、胰腺、肺、肾脏和脾中高度表达。已有研究证实，ORMDL3蛋白可调节由内质网介导的Ca2+信号传导及细胞压力，从而导致未折叠蛋白反应，进而成为炎症发生的内源性诱因 [7]。此外，脂质作为细胞膜主要组成之一，参与细胞增殖、信号传导和细胞凋亡等。ORMDL3的表达异常可能引起脂质代谢紊乱而致哮喘的发生，但其具体机制未见报道。已有研究证实ORMDL3基因rs7216389多态性与哮喘发病风险密切相关 [8-14]，但在中国人中的研究目前仍无统一结论。本研究旨在对ORMDL3基因rs7216389多态性与中国人哮喘发病风险相关的研究进行系统评价和Meta分析，以期为其应用提供循证医学证据。
1 资料与方法
1.1 纳入与排除标准
1.1.1 研究类型
病例-对照研究。文种限中、英文。
1.1.2 研究对象
基于中国人的研究，经临床明确诊断为哮喘。
1.1.3 暴露因素
ORMDL3基因rs7216389多态性。
1.1.4 结局指标
哮喘的发病风险。
1.1.5 排除标准
① 重复发表的文献；② 原始研究数据无法提取；③ 摘要、综述等；④ 对照组基因型频率分布不符合哈迪温拍格平衡（HWE）。
1.2 检索策略
计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library（2014年第8期）、CBM、CNKI、VIP和WanFang Data，并追溯纳入文献的参考文献，查找国内外关于ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘相关性的病例-对照研究，检索时限均为从建库至2014年8月。采用主题词与自由词相结合的方式进行检索。中文检索词包括哮喘、多态性、ORMDL3基因；英文检索词包括asthma、polymorphism、ORMDL3、China、Chinese。以PubMed为例，其具体检索策略见框1。
框 1 PubMed检索策略
#1 asthma #2 polymorphism #3 ORMDL3 #4 China OR Chinese #5 #1 AND #2 AND #3 AND #4
1.3 文献筛选、资料提取与质量评价
由2位研究者按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料和评价纳入研究的方法学质量，如遇分歧则讨论解决。采用自制的资料提取表提取资料，提取内容主要包括第一作者、发表时间、国家、种族、基因分型方法、病例组和对照组突变基因的频率。纳入研究的方法学质量采用NOS量表（Newcastle-Ottawa Scale） [15]进行评价。
1.4 统计分析
采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。采用OR值及其95%CI为效应分析统计量，以显性模型（CC+TC vs. TT）和隐性模型（CC vs. TT+TC）为代表进行统计分析。异质性检验采用Q检验，检验水准α=0.1，同时结合I2值对异质性进行定量分析。若P≥ 0.1且I2≤ 50%时，提示各研究结果间无统计学异质性，采用固定效应模型进行Meta分析；若P＜0.1和/或I2＞50%时，提示各研究结果间存在统计学异质性 [16]，采用随机效应模型进行Meta分析，并对可能导致异质性的因素（如按年龄分为成人哮喘和儿童哮喘）进行亚组分析 [17]。发表偏倚采用Stata 11.0软件进行检测。Meta分析的检验水准为α=0.05。
2 结果
2.1 文献检索结果
初检出相关文献121篇，经逐层筛选后，最终纳入7个病例-对照研究 [8-14]，合计1 711例哮喘患者，1 763例对照。文献筛选流程及结果见图 1。
图1
文献筛选流程及结果
2.2 纳入研究的基本特征与质量评价
纳入研究的基本特征见表 1，其中3个研究的研究对象是成人哮喘患者，4个研究的对象是儿童哮喘。纳入研究的方法学质量评价结果见表 2。
表1
纳入研究的基本特征
表2
纳入研究的方法学质量评价
2.3 Meta分析结果
2.3.1 显性模型
共纳入哮喘组1 711例，对照组1 763例。固定效应模型Meta分析结果显示，ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘发病风险有相关性[OR=0.71，95%CI（0.62，0.81），P＜0.000 01]（图 2）。Begg’s漏斗图显示各研究在漏斗两侧的分布基本对称，Egger’s检验结果显示t= -1.09，P=0.326，提示不存在发表偏倚（图 3）。按年龄进行亚组分析，结果显示，ORMDL3基因rs72l6389多态性与成人哮喘[OR=0.71，95%CI（0.61，0.83），P＜0.000 1]和儿童哮喘[OR=0.69，95%CI（0.52，0.90），P=0.006]发病均具有相关性（图 4）。
图2
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析（CC+TC vs. TT）：总体分析
图3
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析的发表偏倚（CC+TC vs. TT）
图4
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析（CC+TC vs. TT）：亚组分析
2.3.2 隐性模型
共纳入哮喘组1 711例，对照组1 763例。固定效应模型Meta分析结果显示，ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘发病风险无有相关性[OR=0.80，95%CI（0.62，1.02），P=0.07]（图 5）。Begg’s漏斗图显示各研究在漏斗两侧的分布基本对称，Egger’s检验结果显示t= -1.50，P=0.193，提示不存在发表偏倚（图 6）。按年龄进行亚组分析，结果显示，ORMDL3基因rs72l6389多态性与成人哮喘[OR=0.95，95%CI（0.72，1.26），P=0.72]不相关，但是与儿童哮喘[OR=0.45，95%CI（0.27，0.76），P=0.003]发病具有相关性（图 7）。
图5
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析（CC vs. TT+TC）：总体分析
图6
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析的发表偏倚（CC vs. TT+TC）
图7
ORMDL3基因rs72l6389多态性与中国人哮喘易感性的Meta分析（CC vs. TT+TC）：亚组分析
3 讨论
随着环境污染日益加重，中国人哮喘的发病率呈逐年上升的趋势 [18-20]。关于中国人哮喘基因易感性的研究，目前主要的手段有核心家系和病例-对照两种。已有不少研究证实ORMDL3基因rs7216389多态性与中国人哮喘的发病相关，但由于单个研究纳入研究对象较少，研究手段单一，检验效能低，因此无法得出确切的结论，需要更为有力的检验手段来进行研究。Meta分析则将研究同一目的的所有数据进行汇总，增大样本量，增大检验效能，得出更为可靠的结论。因此，本研究使用Meta分析的方法对所有有关ORMDL3基因rs7216389多态性与中国人哮喘相关的文献进行分析，以期待得到更可靠的结论。
本研究共纳入7个对中国人中ORMDL3基因rs7216389 多态性与哮喘的易感性研究进行Meta分析。研究发现，显性模型总体合并效应结果为[OR=0.71，95%CI（0.62，0.81），P＜0.000 01]。这提示该多态性与中国人哮喘发病机制具有相关性，该多态性为哮喘发病风险的保护因子。有研究报道，哮喘的发生与年龄、性别、环境因素等多种因素密切相关。在本研究中，我们按照年龄进行了亚组分析，相关结果提示该多态性不仅与成人哮喘相关，而且也与儿童哮喘相关，提示该多态性是哮喘发病机制中重要的关键因子。
本研究的局限性：首先，由于检索的文献均为正式刊物上发表的文章，因此，不排除有未发表的研究未被纳入，这可能带来一定的偏倚。其次，本研究仅对年龄进行了亚组分析，但未对其他环境因素进行亚组分析。第三，本研究仅研究了1个基因的多态性，未考虑基因与基因的相关关系。尽管如此，本研究严格按Meta分析的相关要求进行操作，将各种影响因素降到最小，以保证本研究结论的准确可靠。
总之，本研究发现，ORMDL3基因rs7216389多态性与中国人儿童和成人哮喘发病均密切相关。将来需要纳入更多研究，进一步阐明其在哮喘发病中的作用。
