小鼠甲状腺转录因子-2转基因动物表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达_《华西医学》

作者：

黄磊 ¹ ,  石冰 ^2,3 , 郑谦 ^2,3 , 蒙田 ^2,3 , 王龑 ^2,3

1广州市第一人民医院口腔科（广州，510016）;2四川大学口腔疾病研究国家重点实验室;3四川大学华西口腔医院唇腭裂外科;

关键词：

甲状腺转录因子-2 表达载体骨髓间质干细胞转染基因小鼠

DOI：

10.7507/1002-0179.20130522

视频：

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目的　构建小鼠甲状腺转录因子-2（TTF-2）转基因动物表达载体（pBROAD3-TTF-2），观察其在小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）中的表达。方法　从C57BL/6J小鼠肝脏组织中提取基因组DNA，利用聚合酶链式反应方法扩增出TTF-2基因1 113 bp开放阅读框，通过DNA重组技术将TTF-2基因片段插入克隆载体pMD18-T中，经测序正确后，再重组于pBROAD3-mcs中，构建转基因动物表达载体pBROAD3-TTF-2，用酶切电泳分析对其进行鉴定。运用脂质体转染试剂将其转染BMSC后，蛋白质印迹法检测TTF-2基因的表达。结果　① DNA测序证实目的基因序列正确无突变，酶切电泳分析得到相应的目的片段，大小与理论计算值一致，成功构建转基因动物表达载体pBROAD3-TTF-2。② 蛋白质印迹法显示转染的BMSC高表达TTF-2蛋白。结论　成功构建了pBROAD3- TTF-2转基因动物表达载体，显示其转染BMSC后TTF-2基因的表达，为下一步建立TTF-2转基因小鼠模型奠定了基础。

引用本文： 黄磊,石冰,郑谦,蒙田,王龑. 小鼠甲状腺转录因子-2转基因动物表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达. 华西医学, 2013, 28(11): 1647-1650. doi: 10.7507/1002-0179.20130522 复制

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5.	Castanet M, Park SM, Smith A, et al. A novel loss-of-function mutation in TTF-2 is associated with congenital hypothyroidism, thyroid agenesis and cleft palate[J]. Hum Mol Genet, 2002, 11(17): 2051-2059.
6.	黄磊, 石冰, 宋庆高, 等. TTF-2 和TGFβ3 在C57BL/6J 小鼠腭突发育过程中的表达变化[J]. 河北医药, 2011, 33(14): 2085-2087.
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8.	王素梅, 李力, 张玮, 等. 组织蛋白酶L基因真核表达质粒的构建与鉴定[J]. 广西医科大学学报, 2008, 25(2): 219-221.
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10.	Kisseberth WC, Brettingen NT, Lohse JK, et al. Ubiquitous expression of marker transgenes in mice and rats[J]. Dev Biol, 1999, 214(1): 128-138.
11.	Farley FW, Soriano P, Steffen LS, et al. Widespread recombinase expression using FLPeR (flipper) mice[J]. Genesis, 2000, 28(3-4): 106-110.
12.	J萨姆布鲁克,拉塞尔DW. 分子克隆实验指南[M]. 3版. 黄培堂, 等, 译. 北京: 科学出版社, 2002: 331-332.

1. 　Zannini M, Avantaggiato V, Biffali E, et al. TTF-2, a new forkhead protein, shows a temporal expression in the developing thyroid which is consistent with a role in controlling the onset of differentiation[J]. EMBO J, 1997, 16(11): 3185-3197.
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