利用小干扰RNA技术在人脐静脉内皮细胞HUVEC中沉默copper chaperone for SOD1基因的研究_《华西医学》

作者：

四川大学华西医院（成都，610041） 1移植外科，2再生医学研究中心;

关键词：

copper chaperone for SOD1 基因沉默小干扰RNA

DOI：

10.7507/1002-0179.20130227

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目的　采用RNA干扰技术沉默CCS（copper chaperone for SOD1）基因，构建相关小干扰RNA（siRNA），探索出针对CCS的高效siRNA序列。方法　合成用于人脐静脉内皮细胞（HUVEC）细胞中沉默CCS基因的siRNA。应用脂质体转染的方法在HUVEC细胞中对CCS基因进行RNA沉默。蛋白免疫印迹Western blotting检测沉默前后CCS蛋白表达变化的情况，甲基四唑蓝法MTT检测转染前后细胞活力。最后用单因素方差分析对数据进行统计学分析，以确定有效的siRNA序列。结果　转染前后细胞形态无肉眼可见变化，转染后细胞活力分别为98.5%和98.8%。CCS蛋白沉默率分别为63.7%和61.4%。结论　采用siCCS-2和siCCS-3序列转染条件对HUVEC细胞活力损伤小，CCS沉默效率高，实验条件稳定，重复性好。为我们继续研究沉默CCS后抑制血管内皮细胞的生长增殖、血管形成提供了稳定的实验基础。

引用本文： 刘俊,陈克霏. 利用小干扰RNA技术在人脐静脉内皮细胞HUVEC中沉默copper chaperone for SOD1基因的研究. 华西医学, 2013, 28(5): 732-736. doi: 10.7507/1002-0179.20130227 复制

1.	Yoshiaki F, Andrew ST, Thomas V. Oxygen-induced maturation of SOD1: a key role for disulfide formation by the copper chaperone CCS[J]. EMBO J, 2004, 6 (23): 2872-2881.
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3.	王刚，张凯伦. 人脐静脉内皮细胞的研究和应用[J]. 医学综述，2011, 17（7）：972-975.
4.	Monika D, Derek MD. Breaking down the barriers: siRNA delivery and endosome escape[J]. J Cell Sci, 2010, 123(8): 1183-1189.
5.	Nina MB, Andrew S, Torres PE, et al. Oxygen and the copper chaperone CCS regulate posttranslational activation of Cu, Zn superoxide dismutase[J]. PNAS, 2004, 101(15): 5518-5523.
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9.	Heejeong K, Hwa-YS, Sarah MB, et al. Mechanisms for copper acquisition, distribution and regulation[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2009, 296(2): G356-G364.
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